РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ




Преципитация и агглютинация - это довольно сходные реакции, которые различаются главным образом на основании физических свойств АГ. В первом случае он представлен в растворимой, во втором – в корпускулярной формах. В основе РП лежит образование преципитата в процессе реакции АГ - АТ.

РП высоко специфична и чувствительна.

Ингредиенты реакции:

1. растворимый АГ или гаптен (преципититоген);

2. АТ – преципитины (иммунная преципитирующая сыворотка; получают иммунизацией кроликов соответствующими АГ-ми);

3. изотонический раствор хлорида натрия или агаровый гель.

Методы постановки РП:

1) РП в растворах – р. кольцепреципитации; 2) РП в геле

Реакцию кольцепреципитации ставят в узких преципитационных пробирках, в которые разливают преципитирующие сыворотки. Затем наливают раствор преципитиногена. При положительной реакции на границе соприкосновения ингредиентов появляется мутное кольцо преципитации. Если в качестве антигенов в реакции кольцепреципитации используют прокипяченые и профильтрованные водные экстракты органов и тканей, то реакция носит название реакции термопреципитации по Асколи,применяемая для обнаружения термостабильных гаптенов возбудителей сибирской язвы и чумы (см. прилож. 3, рис.6).

.

Одна из разновидностей РП в геле (реакция Оухтерлони) позволяет определять токсигенность дифтерийной палочки с помощью антитоксической сыворотки. В чашку Петри с питательной средой помещают полоску фильтровальной бумаги, пропитанной антитоксической противодифтерийной сывороткой и засевают исследуемыми культурами в виде штрихов, перпендикулярных к полоске бумаги. Инкубируют при 37 0С в течение суток. При наличии токсигенной культуры в месте взаимодействия токсина с антитоксином образуются линии преципитации (см. раздел 3, рис.5).

Реакция преципитации в геле носит название иммунодиффузии. Часто форезом в геле – иммуноэлектрофорез. Принцип метода: исследуемый антиген фракционируют электрофоретически, полученные фракции анализируют методом двойной диффузии при помощи антисыворотки.

Постановка РП по Асколи с целью обнаружения антигена сибиреязвенных бацилл. Для постановки реакции преципитации необходимо иметь:преципитиноген - гаптен B. anthracis (экстракт из тканей), преципитин (преципитирующая сибиреязвенная сыворотка) и физиологический раствор.

Приготовление термопреципитиногена.

1. В колбочку, содержащую 1 г измельчённой кожи или 1 мл культуры B. anthracis налить 10 мл физиологического раствора.

2. Колбу поместить в кипящую баню на 30-45 минут.

3. Профильтровать через асбестную вату. Фильтрат должен быть совершенно прозрачен.

Для реакции преципитации фильтрат разводится в 100 раз и более.

Постановка реакции кольцепреципитации.

1) В преципитационную пробирку наливается 0,3 мл преципитирующей сыворотки цельной или в разведении 1:5, 1:10.

2) По стенке пробирки осторожно наслаивается преципитиноген.

Реакция считается положительной, если на границе двух жидкостей образуется мутное кольцо выпадающего белка не позднее 5-15 минут (см. прилож. 3, рис.6).

При постановке реакции преципитации применяют следующие контроли:

а) антиген и физиологический раствор;

б) специфическая сыворотка и физ. раствор;

в) антиген и неспецифическая сыворотка.

Во всех контрольных пробирках помутнения не должно быть. Для реакции преципитации пользуются специальными преципитационными пробирками высотой 40-60 мм и диаметром 4-5 мм, преципитация в узких пробирках наступает значительно скорее и проявляется более чётко, чем в обычных пробирках, их тщательно моют и высушивают, чтобы стекло их было совершенно прозрачным и сухим.



Работы которые могут быть Вам интерессными chas-nevirazitelnogo-chteniya-4-glava.html

chas-nevirazitelnogo-chteniya-5-glava.html

chas-nevirazitelnogo-chteniya-6-glava.html

chas-nevirazitelnogo-chteniya-7-glava.html

chas-nevirazitelnogo-chteniya-8-glava.html

chaso-prostorovі-koordinati-tvoru.html

chasov-20-minut-utra-2-oktyabrya-1988-goda.html

chasov-42-minuti-leningrad-gostinica-rossiya.html

chasovie-tarifnie-stavki-i-dolzhnostnie-okladi.html

chasovie-tarifnie-stavki-po-razryadam-v-rub.html

chasovie-tarifnie-stavki-sotrudnikov-cit.html

chasovie-zatrati-na-toplivo.html

chasov-kak-i-vchera-podnyalsya-veter-hot-bi-na-etot-raz-on.html

chasov-nad-gastronomom.html

chasov-nagradi.html

chasovnya-anastasii-rimlyanki.html

chasovoj-modul-minimalnij.html

chasov-professionalnogo-psihologicheskogo-obucheniya-i-otkrovennogo-obsheniya.html

chasov-tyazhelaya-rabota-i-mgnovennij-uspeh.html

chasov-v-to-vremya-kak-bolshinstvo-vipisannih-pokidali-svoi-palati-znachitelno.html

chasov-znoj-palyashij-ya-dumayu-o-moej-bednoj-zhinette-kotoraya-zhivet-v.html

© domain.tld 2017. Design by Design by toptodoc.ru


Автор:

Дата:

Каталог: Образовательный документ